ELISA કીટ એન્ટિજેન અથવા એન્ટિબોડીના ઘન તબક્કા અને એન્ટિજેન અથવા એન્ટિબોડીના એન્ઝાઇમ લેબલિંગ પર આધારિત છે. ઘન વાહકની સપાટી પર બંધાયેલ એન્ટિજેન અથવા એન્ટિબોડી હજી પણ તેની રોગપ્રતિકારક પ્રવૃત્તિ જાળવી રાખે છે, અને એન્ટિજેન અથવા એન્ટિબોડી લેબલ થયેલ એન્ઝાઇમ તેની રોગપ્રતિકારક પ્રવૃત્તિ અને એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિ બંને જાળવી રાખે છે. નિર્ધારણ સમયે, પરીક્ષણ હેઠળનો નમૂનો (જેમાં એન્ટિબોડી અથવા એન્ટિજેન માપવામાં આવે છે) ઘન વાહકની સપાટી પર એન્ટિજેન અથવા એન્ટિબોડી સાથે પ્રતિક્રિયા આપે છે. ઘન વાહક પર રચાયેલ એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી કોમ્પ્લેક્સ ધોવા દ્વારા પ્રવાહીમાં રહેલા અન્ય પદાર્થોથી અલગ પડે છે.
એન્ઝાઇમ-લેબલવાળા એન્ટિજેન્સ અથવા એન્ટિબોડીઝ ઉમેરવામાં આવે છે, જે પ્રતિક્રિયા દ્વારા ઘન વાહક સાથે પણ જોડાય છે. આ સમયે, નક્કર તબક્કામાં એન્ઝાઇમની માત્રા નમૂનામાં પદાર્થની માત્રાના પ્રમાણમાં હોય છે. એન્ઝાઇમ પ્રતિક્રિયાના સબસ્ટ્રેટને ઉમેર્યા પછી, સબસ્ટ્રેટ રંગીન ઉત્પાદનો બનવા માટે એન્ઝાઇમ દ્વારા ઉત્પ્રેરિત થાય છે. ઉત્પાદનની માત્રા નમૂનામાં પરીક્ષણ કરેલ પદાર્થની માત્રા સાથે સીધી રીતે સંબંધિત છે, તેથી રંગની ઊંડાઈ અનુસાર ગુણાત્મક અથવા જથ્થાત્મક વિશ્લેષણ હાથ ધરવામાં આવી શકે છે.
ઉત્સેચકોની ઉચ્ચ ઉત્પ્રેરક કાર્યક્ષમતા આડકતરી રીતે રોગપ્રતિકારક પ્રતિભાવના પરિણામોને વિસ્તૃત કરે છે, જે પરીક્ષાને અત્યંત સંવેદનશીલ બનાવે છે. ELISA નો ઉપયોગ એન્ટિજેન્સ નક્કી કરવા માટે થઈ શકે છે, પરંતુ તેનો ઉપયોગ એન્ટિબોડીઝ નક્કી કરવા માટે પણ થઈ શકે છે.
ELISA કિટના મૂળભૂત સિદ્ધાંતો
તે પદાર્થને એન્ઝાઇમ સાથે જોડવા માટે એન્ટિજેન અને એન્ટિબોડીની ચોક્કસ પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ કરે છે અને પછી માત્રાત્મક નિર્ધારણ માટે એન્ઝાઇમ અને સબસ્ટ્રેટ વચ્ચે રંગની પ્રતિક્રિયા પેદા કરે છે. માપનનો પદાર્થ એન્ટિબોડી અથવા એન્ટિજેન હોઈ શકે છે.
નિર્ધારણની આ પદ્ધતિમાં ત્રણ રીએજન્ટ્સ જરૂરી છે:
â સોલિડ ફેઝ એન્ટિજેન અથવા એન્ટિબોડી (રોગપ્રતિકારક શોષક)
â¡ એન્ઝાઇમ લેબલ થયેલ એન્ટિજેન અથવા એન્ટિબોડી (માર્કર)
એન્ઝાઇમ ક્રિયા માટે સબસ્ટ્રેટ (રંગ વિકાસ એજન્ટ)
માપમાં, એન્ટિજેન (એન્ટિબોડી) સૌપ્રથમ ઘન વાહક સાથે બંધાયેલું છે, પરંતુ હજુ પણ તેની રોગપ્રતિકારક પ્રવૃત્તિ જાળવી રાખે છે, અને પછી એન્ટિબોડી (એન્ટિજેન) અને એન્ઝાઇમનું સંયોજક (માર્કર) ઉમેરવામાં આવે છે, જે હજી પણ તેની મૂળ રોગપ્રતિકારક પ્રવૃત્તિ અને એન્ઝાઇમ જાળવી રાખે છે. પ્રવૃત્તિ. જ્યારે કન્જુગેટ ઘન વાહક પર એન્ટિજેન (એન્ટિબોડી) સાથે પ્રતિક્રિયા આપે છે, ત્યારે એન્ઝાઇમનો અનુરૂપ સબસ્ટ્રેટ ઉમેરવામાં આવે છે. એટલે કે, ઉત્પ્રેરક હાઇડ્રોલિસિસ અથવા રેડોક્સ પ્રતિક્રિયા અને રંગ.
તે જે રંગની છાયા ઉત્પન્ન કરે છે તે માપવામાં આવનાર એન્ટિજેન (એન્ટિબોડી)ની માત્રાના પ્રમાણસર હોય છે. આ રંગીન ઉત્પાદનને નરી આંખે જોઈ શકાય છે, ઓપ્ટિકલ માઈક્રોસ્કોપ, ઈલેક્ટ્રોન માઈક્રોસ્કોપ, સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર (એન્ઝાઇમ લેબલ ઈન્સ્ટ્રુમેન્ટ) દ્વારા પણ માપી શકાય છે. પદ્ધતિ સરળ, અનુકૂળ, ઝડપી અને વિશિષ્ટ છે.